科常识题的贬责通常依赖于科学本领的改良杨幂 丝袜,而高新科技获取的数据要历程处理才不错酿成脍炙生齿的形态。图像数据化或可视化是越来越基本的条目。
之前我给各人先容过两个对于弘大软件 Imaris 的使用教程。它的功能不单是限于将图片输出为更好意思不雅的时局,将图片信息索要输出为统计数据,致使针对图片的不同区域进行数据分析。
它还不错将多张图片全部输出成动图,便捷各人像看电影相似不雅看系列数据,还不错将系列数图片的数据索要出来,直不雅反馈电影里发生的变化。
此外,在每个不同的教程中,我都将在 Tips 中渗入先容 Imaris 为东谈主所冷漠的极(巨)体(好)贴(用)功能。
当咱们斟酌细胞亚定位相似的不同的卵白(举例转录因子 A 和某共激活子 B)是否有相似的细胞定位时,咱们不错对它俩进行免疫染色,获取单层共聚焦图像,不雅察 A 与 B 在细胞核内是否共定位即可。
然则若是咱们的不雅察对象是细胞亚定位不完全相通的两个卵白,只是在单层面不雅察两个卵白位置是否重合是十分让东谈主迷惑和持狂的。
一个严格的科研扫尾完全弗成以用藕断丝联的单纯的主不雅判断来界说,这时期咱们通常还需要对拍摄对象进行 Z 轴层扫,重构不同卵白在系数这个词细胞的简直位置。
是的,当咱们终于解惑后,咱们还要让 reviewer 们或读者们对咱们的扫尾一目了然,这时咱们需要展示一个不同层面的动态图,何况标注(highlight)指引卵白简直位置,一个丰富灵动的动画比一张痴呆的图更让东谈主信服咱们的扫尾论断。
今天先给各人先容若何哄骗 Imaris 输出 Z 轴层扫图片的系列动图,并重心标注科研汪们思绝顶展示的实质:
1.掀开 Imaris 软件,【Ctrl+D】调出 Display 界面。(这一步确信各人也曾老练了吧)。如下图。
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2. 凯旋将 Z 轴层扫的图片拖入 Imaris 界面,得到下图(您不错看到,输入的图片们酿成一个有厚度的立方体)。
不知谈各人提神到没:每次输入图片后,系统老是自动参加 Surpass 界面,在这个界面您不错凯旋使用软件的各式悭吝具,真的亦然系数这个词软件最常用的部分。
但这很容易让咱们冷漠软件的其他弘大器具栏。咱们需要徐徐探索它的系数弘大之处。
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Tips 1: 比如 Slice (薄片)器具栏就很好用,之前的教程表面上应该说起测量功能。
点击 Slice 按钮,您会发现右侧栏目转酿成 Measure 栏(之前在 Surpass 界面下是 Camera 栏),针对图片点击两次鼠标左键(如白色箭头所示,点击两次会在预备点上出现一个小十字)不错自动获取这两次点击处的 Distance (间距)(如右边红框所示)。
这在统计时不错用上:手动输入更简直的细胞直径不错匡助软件更准确判断出某张图中细胞的参数,而不是连染色杂质或其他非细胞因素也计入。
3. 需要热心 Slice 的第二个功能便是浏览(不同层面),这在本次碰见的问题中便是一个很好的贬责问题的器具。
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如上图,点击左上角的三角箭头不错让不同层面递次播放,而通过手动拖动左侧 bar 上的方块不错东谈主为实现稽查某个层面的图片。
这样在判断共定位时就十分好用杨幂 丝袜,举例我要判断位于细胞质的绿色卵白是否和位于中间丝的红色卵白是否抒发在团结个细胞中,通过多个层面的稽查就不错准确判断出红绿卵白莫得同期抒发在团结个细胞中。
而当咱们回到 Surpass 界面时,咱们就很迷惑。(如下图白圈圈所示位置,明明看到红绿重迭的黄色信号,不错判断共标么?藕断丝联,不足为训)
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4. 接下来咱们将哄骗软件的动画功能将系数这个词细节展示出来。
思思就有点小喜跃呢(虽然当你的卵白也存在靠得很近不好判断时你也不错这样干,不然无须弄巧成拙)。
亚洲日韩天堂在线点击 Animation 按钮,界面切换成动画界面,下方蓝色界面是动画的系数帧。
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5. 因为是 Z 轴层扫相片,是以咱们需要配置一个 Ortho Slicer(如下图方框 1)。
您不错泄露这个器具为正交切片:将之前在 Surpass 下为一个正方体的多层重迭图片成一张张的。
之后咱们遴荐 ZY plane, 这些图片就酿成 Z 轴上单张的(如下图方框 2, 如红色箭头所示,您看见一个显现框,显现面前显现层面的 Z 轴信息,左侧尺状图不错滑动,这样您不错开脱稽查每个层面的图,这和之前的 Slice 功能的浏览功能相似)。
针对这 14.5um 厚的图,咱们不错配置 15 Frames (如方框 3,系统自动默许的是 100 帧,如上图所示的深蓝色窗口),这样之后的动画就有 15 帧。
Tips 2: 动画窗口的深蓝色条的每个浅白色竖线对应动画的 1 帧,数一数,碰劲 15 帧。若是您的图是一张大图拼接 + Z 轴层扫,您不错配置更多的帧数,这样您不错在后期制作时添加更多包含图像细节的图片。
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6. 最浅易的动画制作是凯旋添加首帧最底层图片和末帧最上层图片,这样系统动画将自动从最底层播放到最上层。
a. 拉动上图的方框 2 底下的尺状转机箭头,将 Z 轴转机到最低(或则凯旋输入:如 0.5um)之后在动画窗口的第一帧(即第一条竖线处)点击一下鼠标左键,这时动画的焦点就位于第一帧,点击 + Add, 那么面前画面(即 0.5um 处的单层图片);
b. 拉动转机尺将 Z 轴转机到最高(如 14.5um, 也便是尺子拉到最右侧),在动画窗口点击临了一帧,点击 + Add, 则面前画面(14.5um)就变为临了一帧。
7. 点击上图方框 3 右侧的小三角,不错播放或住手播放动画。
8. 点击播放按钮下方的实心圆,弹挪动画输出界面:不错遴荐填写输挪动画的名字,类型和播放速率(我填写了 10 帧 / 秒),之自后望望初步扫尾。
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Tips 3:在制作动画时收受确面前界面所包含的通谈信息才会被显现!
若是您发现你需要多展示几个通谈(比如咱们在展示组织切顷刻一般都会加上细胞核的信息),再从头制作动画时,只需要点击 Delete All, 再次添加首末帧即可(此时铭记添加必要的通谈,斌且通过 Display 功能将展示通谈的信噪比调到适应)
9. 接下来将动画里一些细胞荒谬标志一下。点击 Annotate (位于 Animation 左二的位置)。
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参加 Annotate 界面后,(如下图)点击 Add Annotation, 这时期底下的界面就出现了:
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10. 启动标注:在标志界面的第二个窗格(如蓝色小方框所示)来修改标志的时局。
您不错遴荐 Sphere 偶然 Arrow (箭头)等,我一般习气用箭头标志(默许的是一个 Sphere, 这样凯旋在一堆细胞中标志,相配容易挡住动画中的预备,是以提出遴荐箭头和圈,而不是球算作标志的时局)。
另外,勾掉 Text box, 只留住标志而莫得注解(至于注解请在您的 Figure legend 里讲授,致使不明释东谈主家也不错看到你标注了两个细胞)。
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此外,点击时局前边的正方块不错遴荐标注的热沈。(如下图)
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11. 切换回动画窗格,点击窗格下方的红色实心圆,输挪动画。
从动画中不错看出,红色信号和绿色信号所存在的细胞不同:细胞突起蔓延不完全重合。(若是皆集蓝色通谈细胞核)
Tips 4: 将图片的细节部位放大(通过转机软件底部的 Zoom , 将图片放大多倍,让界面只显现局部放大的细胞图,添加一帧,算作第 16 帧)这样动画在播放到这一帧时就会出现放大的细节。
若是远隔几帧,连接添加局部放大的图片,并添加这一帧(比如说第 20 帧),这样 16 和 20 帧之间就会自动不时从上一张细节图挪动到这张细节图,从举座播放到局部细节展示,会让动画更炫酷。也不错用这样的款式展示您思要展示的细节。
好了,哄骗 Imaris 让你的图片灵动起来吧!何况期待咱们的第四期教程!
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